在进行抑菌试验时,采用的是微量肉汤稀释法,主要步骤包括抗菌药物和培养基的制备,接种物的制备,以及结果的判断。
1.2.1.抗菌药物和培养基制备
常规操作,但需无菌处理。将抗菌药物进行倍比稀释,分别加入到预先灭菌的96孔聚苯乙烯板中。第1至第11孔加入药液,每孔10微升,第12孔不加药作为生长对照。完成后,板子需冰冻干燥并密封,储存在-20℃的环境中备用。
1.2.2.MIC板制备
严格遵循无菌操作,将稀释后的抗菌药物溶液均匀分装,确保第1至第11孔药物浓度递减,分别为128、64、32等,直至最低的0.125微克/毫升。第12孔作为生长对照。
1.2.3.接种物制备
取浓度为0.5麦氏比浊标准的菌悬液,用MH肉汤1:1000稀释后,每孔注入100微升,然后密封,置于35℃的普通空气孵箱中培养,时间视菌种而定,如嗜血杆菌属、链球菌属20~24小时,葡萄球菌和肠球菌对苯唑西林和万古霉素需满24小时。
1.2.4.结果判断
以能完全抑制细菌生长的最低药物浓度作为MIC。只有当阳性对照孔(无抗生素)内细菌生长明显时,试验才有意义。若出现单一跳孔,表示抑制细菌生长的最高药物浓度,如有多处跳孔,则需重新试验。对于革兰阴性杆菌,微量肉汤稀释法测得的MIC通常与常量法一致或低一个稀释度。
扩展资料
用于测定抗菌药物体外抑制细菌生长效力的试验称为抑菌试验。通过抑菌实验,可以测定一个药物的最低抑菌浓度,用以评价该药物的抑菌性能,这是抗菌药物的最基本的药效学数据。主要方法有进行定性测定的扩散法(如抑菌斑试验)和进行定量测定的稀释法(如最低抑菌浓度实验)。
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