A260:A230是分光光度计测量RNA溶液的浓度出现的数值,表示样品的纯度。
1、A260nm:核酸的吸收峰测,测RNA,DNA等的浓度用的。260nm是核酸分子吸收峰的波长,是核酸最高吸收峰的吸收波长,最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围,稀释或浓缩样品,使之在此范围内;如果吸光度小于0.05,检查是否存在操作因素(如移液不准确,样品内有悬浮物等)影响。
2、A230nm:测定碳源物质,如酚,糖类等浓度用的,是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估。A230表示样品在230nm的波长处出现了吸收。在A230处出现吸收峰的原因是样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等。
3、A260:A230可以表征样品的纯度,A260:A230的比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
扩展资料
一、RNA质量检验。
RNA样品的品质检测一般分为总量,纯度与完整性三大项。
1、总量:微量分光光度计测260nm吸收值计算。
2、纯度:微量分光光度计测260nm/230nm吸收值的比值,用于评估有机溶剂残留;260nm/280nm吸收值的比值,用于评估蛋白质污染比例。
3、完整性:以AgilentBioanalyzer进行毛细管电泳(capillaryelectrophoresis),并以软件的RIN(RNAIntegrityNumber)分数评估,10为RNA完整性最好,0为最差。
二、RNA纯度。
RNA在纯化过程中容易受到DNA、蛋白质及有机溶剂的影响,这些残存物将会影响以后的操作。
光谱分析(NANODROP)利用物质对不同波长光的吸收度的不同,可以鉴别出溶液纯度及浓度。
RNA溶液的A260/A280的比值是一种RNA纯度检测方法,比值范围一般为1.8-2.1。各项实验对RNA纯度要求不一,比如即使比值超出这个范围,RNA样品也一样可以用于一些普通实验中,如Northern杂交、RT-PCR、荧光定量PCR和RNA酶保护等实验。
参考资料来源:
百度百科-分光光度计-核酸的定量
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