四、操作步骤

1 .标准曲线的绘制

(1) 配置标准牛血清白蛋白溶液：在分析天平上精确称取 0.025g 结晶牛血清白蛋白，倒至小烧杯内，加入小量蒸馏水溶解后转入 100m1

容量瓶中，烧杯内的残液用少量蒸馏水冲洗数次，冲洗液一并倒入容量瓶内，最后用蒸馏水定容至刻度，配制成标准蛋自质溶液，其中牛血清白蛋白的浓度为 250 ug/ ml

。

(2) 系列标准牛血清白蛋白溶液的配制：取具塞试管 6 支，按下表加入牛血清白蛋白标准溶液及蒸馏水。然后各管加入试剂甲 5ml ，混合后在室温下放置

10min ，再加 0.5ml 试剂乙，立即混合均匀（这一步速度要快，否则会使显色程度减弱）。 30min 后，以不含蛋白质的 1 号试管为对照，与其他 5

支试管内的溶液依次用分光光度计于 5OOnm 波长下比色。记录各试管内溶液的吸光度。

试剂 1 2 3 4 5 6

250ug/mg 牛血清蛋白（ ml ） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0

H 2 O (ml) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0

蛋白质含量（ ug ） 0 50 100 150 200 250

(3) 标准曲线的绘制：以吸光度为纵标，以牛血清自蛋白含量（ ug ）为横坐标，绘制标准曲线。

2 .样品测定

（ 1) 称取绿豆芽下胚轴 1g 于研钵中，加蒸馏水 2m1, 匀浆。转入离心管，并用 6m1 蒸馏水分次洗涤研钵，并入离心管。 4000r/min 离心 20min. 弃去沉淀，上清液转入容量瓶，定容至 10m1.

(2) 取具塞试管 2 支，各加入上清液 l ml, 分别加入试剂甲 5m1, 混匀后放置 lomin ，然后加试剂乙 0.5 ml ，迅速混匀，室温下放置 30min ，于 500nm 波长下比色，记录吸光值。

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文章来源：天狐定制

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