抑菌圈法是评估杀菌防霉剂效果的重要手段,主要用于判断防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑制作用。这是一种定性或半定量的方法,通过观察杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散情况,筛选出更有效的防霉剂品种。
所需工具和材料包括霉菌培养皿、无菌吸管、圆片滤纸(直径2cm)、无菌水、带玻璃珠的水、带过滤漏斗的三角牌、镊子、接种针、熔化状态的琼脂培养基(45℃左右水浴保温)、一定浓度的药剂以及供试验用的菌种。
试验流程如下:首先,使用接种环从试管斜面挑取菌种,置于带玻璃珠的无菌水中,振荡数分钟后过滤,制成混合孢子悬液。随后,向培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液0.5mL,接着向培养皿内注入15mL至20mL的熔化状琼脂培养基(45℃左右),混合均匀并冷却。用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍,取出后置于培养基平板中央,盖上盖子。在适宜温度下培养2至3天,观察滤纸片周围抑菌圈的形成情况。
试验过程中,所有操作用具和材料需事先灭菌处理,并在无菌室内于火焰旁进行操作。应注意,各种微生物需分别配置混合菌液,混合菌液的浓度一般为106至108cfu/mL。倒入培养皿的琼脂培养基温度应保持在45℃左右,过高或过低都会影响试验结果。同时,各种微生物的最适生长温度不同,恒温培养时应分别放置。
试验结果的评判主要依据抑菌圈的有无及大小。滤纸片吸附的药液向四周扩散,形成清晰的抑菌圈,表明该防霉剂对供试菌有抑制效果。抑菌圈的直径越大,表示药剂的抗菌力越强。在一定浓度范围内,药剂的浓度与抑菌圈的直径呈正相关。此法同样适用于单个菌株的抗菌效果测定。
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