生物碱的色谱检识方法在中药研究和实际工作中应用很广泛,常用的有薄层色谱法、纸色谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等。
(一)薄层色谱
1、吸附薄层色谱法
(1)吸附剂:硅胶、氧化铝
(2)展开剂
(3)显色观察
多数生物碱的簿层色谱需用政良碘化铋钾试剂喷洒,显示桔红色斑点。
(4)应用范围
硅胶和氧化铝薄层色谱适用于分离和检识脂性生物碱。
2、分配薄层色谱法
当用硅胶或氧化铝吸附薄层色谱法检识生物碱效果不理想时,可考虑用分配薄层色谱法。特别是用于分离有些结构十分相近的生物碱,可获得满意的效果。
(1)支持剂:硅胶、纤维素。
(2)固定相
对于脂溶生物碱的分离,多以甲酰胺为固定相;水溶性生物碱或生物碱盐则以水作固定相。
(3)展开剂
分离脂溶性生物碱,应以亲脂性有机溶剂作展开剂。分离水溶性生物碱,则应以亲水性的溶剂作展开剂,如baw系统[正丁醇-乙酸-水(4:1:5),上层]。
(4)应用范围
以甲酰胺为固定相的薄层色谱,适于分离弱极性或中等极性的生物碱,以水为固定相的薄层色谱,适于分离水溶性的生物碱。
3、薄层色谱的显色观察薄层展开后,有色生物碱可直接观察斑点;具有荧光的生物碱在紫外光下显示荧光斑点;绝大多数生物碱的薄层色谱可用改良碘化铋钾试剂显色,显示橘红色斑点。应注意有些生物碱与改良碘化铋钾试剂不显色,可选择某些特殊显色剂。
(二)纸色谱
1、固定相:①水;②甲酰胺;③酸性缓冲液。
2、展开剂:以水作固定相的纸色谱,宜用亲水性溶剂系统作展开剂,如baw[正丁醇-乙酸-水(4:1:5),上层];以甲酰胺和酸性缓冲液作固定相的纸色谱,多以亲脂性有机溶剂系统作展开剂。
3、显色剂
4、应用范围:纸色谱法多用于水溶性生物碱、生物碱盐和弱亲脂性生物碱的分离检识。
(三)高效液相色谱
(四)气相色谱
气相色谱主要适用于挥发性化合物的分析,如麻黄生物碱、烟碱等。
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