血标本的采取应注意的问题，主要包括采血人员的技术要求、避免混入外源性凝血因子、减少血液停留时间、适宜的取血环境和使用标准规格的取血工具与针头、缓慢而均匀地取血、避免气泡形成、立即与抗凝剂充分混合、使用透明度好的真空采血管、硅化玻璃或塑料注射器采血，控制刻度误差、低温保存标本等。

在进行凝血实验检查时，PT和APTT实验均需使用静脉血。采血人员需技术熟练，以避免组织损伤，防止外源性凝血因子进入针管。标本最好单独采集，以减少因标本分配、分装等导致的血液停留时间延长。应使用真空采血管，此管具有充分的透明度，根据取血量设计，能保证抗凝剂与取血量的比例，便于血液和抗凝剂的充分混合。取血时，应使用21G1.5或20G1.5针头，以确保标准化取血。拉针栓的速度应缓慢而均匀，以平稳地进入注射器，避免气泡产生。

在采血后，标本应立即与抗凝剂充分混合。使用真空采血管可以保证抗凝剂与取血量的比例，同时提供充分的空间便于血液和抗凝剂的混合。取血时，应避免使用从输液三通管取血的方式，以减少对局部血液的浓缩和内皮细胞释放组织纤溶酶原活物的影响。

在保存血浆时，需注意不同条件对血浆中凝血因子活性的影响。在32℃下，血浆中的Ⅷ因子活性分别在6、12、24小时后消失50%、60%、95%，即使在4℃保存下，也分别消失5%、55%、70%。V因子活性在32℃分别消失25%、40%、80%，而在4℃则仅损失0%、5%、10%。因此，测定APTT的血浆在-80℃至少可保存1个月，4℃为6小时，20℃为6小时，而32℃仅为2小时。

凝血活酶的使用需要注意标准化应用的国际参考品，包括单一组织凝血活酶和复合组织凝血活酶，并且需要根据敏感性制定共同的敏感性指标（ISI），以确保不同敏感性的凝血活酶在检测PT中能得到相同结果。仪器特有的ISI值可以用于计算国际标准化比值（INR），并确保同一试剂在不同仪器上具有可比性。

试剂准备过程中应使用去离子水，避免pH值升高导致的测试结果延长。用含氨的水配制抗凝剂会导致V因子活性快速降低，从而延长凝血酶原时间。凝血活酶、部分活化凝血活酶、缓冲液和抗凝剂应在4-10℃条件下贮存，但氯化钙和水可在室温下保存。

正常对照血浆通常由多份健康人血标本混在一起，以弥补个体误差。正常对照血浆要求来自20份以上的健康，年龄在18-55岁间的男女个体，且排除服药者。样本离心后混匀，分装小瓶，冻存于-80℃备用或冷冻干燥。

参比血浆用于标准化实验结果，以使结果在不同实验室间具有可比性。WHO已建立多种国际标准品，用于确保结果的一致性。设备与仪器的选择应考虑精密度、可靠性、使用和维修的简易程度。玻璃器皿的选择应考虑清洁度、表面pH值的控制以及使用一次性玻璃和塑料制品的区分。

实验操作中应注意技术误差、温度、pH值、孵育时间、血浆与试剂的混合方式、反应物的量和加入顺序等细节。在一期法凝血酶原时间测定中，需严格控制血浆和凝血活酶的孵育时间。手工法PT或试管法全血凝固时间测定中，倾斜试管的动作应轻柔，角度应小以减少与管壁的接触面积，并应取均值报告。每批实验均需有正常对照。

实验过程中需控制理想的pH环境和溶液的离子强度，反应混合物的pH值应处于7.2-7.4之间。实验结果的准确性还取决于所用反应物的量、加入顺序和不同反应物的孵育时间。每次APTT试验时，活化部分凝血活酶试剂和血浆混合物的孵育时间必须一致。混合过程决定了接触活化的量，技术不佳可能导致测定结果的改变。

在进行APTT和PT实验时，应使用乏血小板血浆，并注意离心条件以保证抗凝剂与标本量的最适比例。实验前需检查血浆是否存在溶血、黄疸、脂血和凝块。红细胞膜含磷脂，溶血标本具有与血小板第Ⅲ因子相似的凝血活性，可能影响APTT值。小凝块会影响试验结果。

报告方式包括以秒数报告PT结果、以患者PT值与正常对照值的比值报告（PTR）、在口服药物监控时以INR报告、不再使用百分比报告（ICSH规定）以及以秒数报告APTT结果。绘制质控图是质量控制的重要手段，可监测仪器、试剂的变化趋势。每天工作中同时测试正常和氨基对照血浆，并用Levey-Jeuny质控图检查结果是否失控。室间质评活动有助于了解本单位结果的准确性，通过比较不同仪器和试剂的结果，了解其差异。

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文章来源：天狐定制

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