细胞增殖是活细胞的关键功能,直接影响生物体的生长、发育、繁殖及遗传。细胞增殖能力的检测,是评估细胞代谢、生理、病理状况、细胞活性和基因毒性的重要指标。细胞增殖与多种因素相关,包括细胞代谢活性、相关蛋白表达和ATP浓度等。
常用的细胞增殖检测方法包括直接计数法、检测细胞代谢活性、检测DNA合成、检测ATP含量、活细胞荧光标记、检测细胞增殖相关抗原、染料排斥法及实时细胞分析法等。每种方法各有特点,适应于不同的实验目的和需求。
直接计数法是一种简便直接的方法,适用于初筛和小规模研究,但无法区分增殖细胞与非增殖细胞。
检测细胞代谢活性方法(如MTT、CCK-8、MTS、XTT和SRB法)简便快速、经济,适用于广泛细胞增殖检测、细胞因子活性检测、细胞毒性检测和药物筛选等。
检测DNA合成的方法(如BrdU/EdU检测法)最准确,能有效判断细胞数量变化,适用于细胞DNA修复、分化及细胞标记物追踪等研究。
检测ATP含量法通过萤火虫荧光素酶及其底物的生物发光检测ATP,结果灵敏,适用于高通量细胞增殖检测和筛选。Promega公司的CellTiter-Glo系统是基于ATP检测的快速细胞活力检测法,具有高灵敏度,是细胞活力检测的金标准。
活细胞荧光标记法如CFSE,可实时分析细胞增殖情况,适用于少量细胞的统计。实时细胞分析法(RTCA)构建动态定量跟踪细胞形态和增殖分化改变的细胞阻抗检测系统,适用于实时检测细胞增殖数据和监测整个培养周期内细胞增殖动力学变化过程。
移植瘤动物模型在肿瘤研究中应用广泛,通过记录移植瘤大小、重量等参数,检测增殖表型。同时,组织切片检测移植瘤内部坏死区域的面积,也是评估增殖的有效手段。
综上所述,选择最合适的细胞增殖检测方法,需综合考虑细胞类型、实验目的和资源条件。每种方法都有其适用范围和局限性,应根据具体需求灵活选择。
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文章来源:天狐定制
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