crRNA与tracrRNA结合形成sgRNA,助力CRISPR-Cas系统高效工作。crRNA与目标DNA序列互补配对,tracrRNA包含Cas蛋白结合结构域及与crRNA的重复序列。融合crRNA与tracrRNA形成sgRNA,简化CRISPR-Cas系统,提高效率与稳定性。通过化学合成、体外转录或体内表达,利用DNA模板包含crRNA、tracrRNA与连接子序列,转录成pre sgRNA,经Cas9蛋白加工成成熟sgRNA。sgRNA连接子形成发夹结构,连接crRNA与tracrRNA。以切割特定DNA序列为例,设计DNA模板包含crRNA、连接子与tracrRNA序列,转录、加工成sgRNA。sgRNA与Cas9蛋白复合,精确识别、切割目标DNA序列。这一过程展示了sgRNA在CRISPR-Cas系统中的关键作用,及其在基因编辑中的应用潜力。
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文章来源:天狐定制
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