细胞凋亡的鉴别方法

细胞凋亡的检测方法中，光学显微镜和倒置显微镜是一种常用的形态学检测方法。凋亡细胞的核染色质呈致密深染，形成致密质块，体积缩小，胞质致密、嗜酸性染色增强，可形成凋亡小体。但这种方法在细胞密集的组织中判断较困难，具有较强的主观性，重复性差，适用于凋亡现象的初步观察。

未染色细胞形态上，凋亡细胞体积变小、变形，全面皱缩，细胞膜完整但出现发泡现象，晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。染色细胞中，姬姆萨（Giemsa）染色、瑞氏染色等显示正常细胞核色泽均一；凋亡细胞染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型形态；坏死细胞染色浅或没染上颜色。

苏木素-伊红（HE）染色显示细胞核固缩碎裂、呈蓝黑色，胞浆呈淡红色（凋亡细胞），正常细胞核呈均匀淡蓝色或蓝色，坏死细胞核呈很淡的蓝色或蓝色消失。荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜以细胞核染色质形态学改变为指标，Hoechst 33342、Hoechst 33258、DAPI等DNA特异性染料结合于DNA非嵌入式区域，紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。PI和Hoechst33342双标检测中，正常细胞和中早期凋亡细胞可被Hoechst着色，形态特征有别。

电子显微镜观察是判断凋亡最经典、最可靠的方法，虽然光学显微镜下可见胞膜起泡现象和凋亡小体，但大多数形态学变化发生在超微结构，光镜观察难以令人满意。透射电镜和扫描电镜分别适用于不同标本的处理，观察凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被吞噬现象。

流式细胞技术通过检查光射特征及荧光参数识别凋亡细胞。细胞穿过激光束时发生散射，分析散射光提供细胞大小及结构信息。光散射特性的检测与荧光参数结合，可准确辨认凋亡细胞。

细胞焦亡的鉴别

细胞焦亡的机制中关键信号包括GSDMD的切割、IL-1β和IL-18前体的切割成熟和释放。证明细胞死亡方式为焦亡需验证以下几点：

①GSDMD的切割（Western检测）；

②Caspase的激活，主要为Caspase-1、Caspase-4、Caspase-5、Caspase-11（Western检测）；

③IL-1β和IL-18前体的切割成熟和释放（Western、ELISA等）；

④细胞形态学检测（CCK-8等）；

⑤染色质完整性检测（Tunel等）。

细胞形态变化检测包括扫描电镜观察、免疫荧光染色（GSDMD/GSDME）和Tunel检测。检测焦亡相关基因及蛋白则需采用q-PCR/Western Blot方法检测基因或蛋白表达水平，ELISA试剂盒检测炎症因子水平，CCK8法测定细胞活力，免疫组化检测组织蛋白的表达。

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文章来源：天狐定制

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