1 核酸变性

?核酸的变性主要指DNA的变性。核酸变性时双链间的氢键断裂成单链，但并不涉及共价键的断裂。引起DNA变性的因素很多，如高温引起的热变性，酸碱改变引起的酸碱变性等。

?2 DNA热变性现象

?当把DNA的稀盐溶液加热到80℃～100℃时，双螺旋结构即发生解体，两条链分开形成无规则线团。同时，一系列物化性质发生改变：260nm处紫外吸收值升高，粘度降低，浮力密度升高。由于二级结构的丧失，也失去了部分或全部生物活性。

?3 增色效应和减色效应

?当DNA分子加热变性后，其260nm的紫外吸收会急剧增加的现象称为增色效应。变性DNA复性后，在260nm处的吸收值减少的现象称为减色效应。

?4 DNA的复性

?变性DNA在适当条件下，又可使两条彼此分开的多核苷酸链重新结合成为双螺旋结构，以上过程称为复性。复性的条件是：(1)变性DNA只有在缓慢冷却时才能复性。如果DNA在沸水浴中加热数分钟后，骤然在冰浴中冷却至低温，DNA不能复性，这也是防止复性的方法。(2)DNA浓度愈大，复性愈快。(3)DNA片段愈长，复性也愈快。

?5 核酸分子杂交

?DNA杂交是指不同来源的DNA经热变性后，在慢慢冷却的复性过程中，由于异源DNA之间的某些区域有相同的序列，可以彼此结合形成杂交分子，称此方法为DNA分子杂交。DNA也可与互补的RNA之间发生杂交，形成DNA—RNA杂交分子。

?核酸杂交可在液相或固相上进行，由于硝酸纤维素膜只吸附变性DNA，故常用硝酸纤维素膜作核酸杂交的支持介质。

?6 如何应用核酸的紫外吸收

?由于嘌呤和嘧啶在240nm～290nm紫外线处表现出强烈的吸收性能，所以可以利用紫外分光光度计测定碱基、核苷、核苷酸和核酸，它们的最大吸收峰值在260nm附近。不同核苷酸有不同的吸收特性，可以此作定性定量检测。

?在研究中常用紫外分光光度计检测少量的DNA和RNA，纯样品和不纯样品的检测根据是：

?纯DNA：OD260／OD280＝1．8

?纯RNA：OD260／OD280＝2

?样品中如含杂蛋白及苯酚(它们在紫外也有吸收)，比值明显降低，故不纯样品不能用此法定量。

?7 熔解温度(Tm）是指什么?受什么因素影响?

?DNA变性的特点是爆发式的，变性作用发生在一个很窄的温度范围内。通常把DNA双螺旋结构失去一半时的温度称为该DNA的熔解温度（Tm）或称熔点。DNA的Tm值一般在70℃～80℃之间。

?影响DNA的Tm值的因素有：

?(1)DNA的均一性。均一性愈高的样品，熔解过程愈是发生在一个很小的范围内。

?(2)G—C之含量。由于G—C之间有3个氢键，因此G—C含量愈高，其Tm值也愈高，成正比关系。所以测定Tm值，可推算出G—C对的含量，其经验公式为：G—C％＝（Tm－69．3）×2．24。

?（3）介质中离子强度的影响。一般来说，离子强度愈低的介质中，DNA的熔解温度也较低，且熔解温度范围也较窄。所以DNA制备应保存在较高浓度的缓冲液中，常在1mol·mL－1的NaCl溶液中保存。

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文章来源：天狐定制

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