固定液是用于固定组织的化学物质。最常用的组织固定剂是甲醛，乙醇溶液也可作为固定剂。还有一些混合固定液可供选择。各种固定液各有其优缺点，可根据实验需求进行选择。

甲醛是一种无色刺激性气体，市售甲醛水溶液的实际浓度为36%~38%，我们用于病理样本固定的浓度为3.6%~3.8%甲醛溶液(9份水加1份浓甲醛)，也称为10%福尔马林液。它不仅价格便宜，组织穿透力强，固定均匀，组织收缩较小，可长期保存样本，适合多种特殊染色。甲醛对脂类和类脂、神经及髓鞘均有良好的固定效果，也可固定高尔基体、线粒体和糖类。然而，甲醛对血红素有破坏作用，所以经甲醛固定的组织均失去原有的颜色。甲醛是一种交联性组织固定剂，主要通过使蛋白质分子发生交联而产生固定作用。

苦味酸是一种黄色结晶体，是一种强酸，易燃易爆。其饱和溶液常用作固定剂。苦味酸能沉淀一切蛋白质，穿透慢，组织收缩明显，但组织无明显硬化，对脂肪和类脂无固定作用。用乙醇溶解后可固定糖类。固定后的组织经乙醇脱水即可，也可用50%或70%的乙醇浸洗。苦味酸可软化火棉胶，因此用苦味酸或其混合固定液固定的组织不宜用火棉胶包埋。苦味酸可使皮肤软化，因此用苦味酸或其混合固定液固定皮肤组织时，易制作完整的切片。用含苦味酸的固定液固定组织时，时间不宜超过24小时，固定后的组织应尽快放入70%乙醇，并在乙醇中滴加少量饱和碳酸锂水溶液或浓氨水，有助于除去苦味酸固定产生的黄色。

锇酸是一种淡黄色结晶，是强氧化剂，不能与乙醇和甲醛等混合。常用其1%~2%的水溶液作为固定液。它主要用于脂类（脂肪和类脂）的固定，也可与肽类和蛋白质作用形成肽-蛋白质或肽-脂交联，使蛋白质固定均匀，不产生沉淀，特别适用于线粒体和内质网的固定，是电镜研究的必需固定剂。

丙酮是一种易挥发易燃的无色液体，可与水、醇、三氯甲烷和醚等混合。可使蛋白质沉淀，渗透力强，对核的固定差。广泛用于酶和组织化学方法中各种酶的固定（如磷酸酶、脂酶和氧化酶等）。作用基本与乙醇相同，但对糖原无固定作用。

冰乙酸是一种带有刺激性气味的无色液体，低于15℃时常结成冰状，故称为冰乙酸。它可与水或乙醇混合，常用其0.3%~5%的溶液作为固定液。冰乙酸不能沉淀白蛋白和球蛋白，但能沉淀核蛋白，所以对染色质固定很好。冰乙酸的穿透速度很快，组织不会硬化，且可防止经乙醇处理时引起的高度收缩及硬化。缺点是能使组织膨胀，尤其对于胶原纤维和纤维蛋白，一般很少单独使用，若单独使用时，只能固定极短时间。高浓度的乙酸会破坏高尔基体和线粒体，故在高尔基体和线粒体染色的固定中不用冰乙酸。

乙醇俗称酒精，为无色液体，可与水无限相溶，具有硬化、固定、脱水等作用。但组织渗透力较弱，固定速度较慢，易使组织变脆。用于固定的浓度为80%~95%。它能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，但核蛋白经沉淀后，能溶于水，不利于染色体的固定，导致核染色不良。此外，高浓度乙醇固定的组织硬化显著，若留置过久，组织收缩明显且质脆，不但影响制片，组织形态也不好。用100%乙醇固定时，其穿透速度快，主要用于糖原的固定，如肝组织、阿米巴原虫和尤因肉瘤的糖原染色。用70%乙醇可较长时间保存组织。

混合固定液的配制时，一般要求氧化剂不要与还原剂混合，以免引起化学反应，使其失去固定作用。10%中性缓冲福尔马林是以pH值7.2~7.4的磷酸盐缓冲液为溶剂配制的甲醛水溶液。它对组织抗原性的保存优于一般的10%福尔马林，是人体和实验动物组织最常用的固定液。同时，10%中性缓冲福尔马林可显著增加对铁离子的检出速度，并且可以避免福尔马林色素的形成。

乙醇-甲醛液（A-F液）有固定兼脱水作用，样本固定后可直接用95%乙醇脱水。Bouin液渗透力强，对组织固定均匀，收缩很少，是一种常规用于外科活检样本固定的良好固定液，特别适用于睾丸、骨髓活检组织的固定，但对免疫组化和分子病理检测影响较大。Carnoy液有防止乙醇硬化和收缩的作用，渗透力强，能很好地固定细胞质和染色质，显示DNA和RNA效果好，特别适合固定外膜致密的组织，在固定组织的同时，能溶解大部分脂肪。Verhoeff液常用于固定眼球，固定48小时后，即可脱水。

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文章来源：天狐定制

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